CryoSol?是一套多組分溶液,用于利用溶解/低溫保護混合劑1-6(SM1-SM6)進行配體溶解和浸泡,以及使用CryoMixes? 1-18(CM1-CM18)進行晶體低溫保護。SM1-SM6和CM1-CM18的成分包括環己烷和丁二醇以及二甲基亞砜(DMSO)。雖然高濃度的DMSO對蛋白質可能有害,但高濃度的環己烷卻能很好地被耐受。環己烷單獨使用或與其他具有低溫保護性能的有機化合物聯合使用時,也非常有效地進行配體溶解。這個試劑盒旨在用于配體溶解,准備蛋白-配體複合物進行共晶篩選。它也適用于准備裝載配體的低溫溶液,用于浸入晶體。
艾美捷MiTeGen-CryoSol?的特點:
溶解疏水性配體。
輕松准備用于浸泡實驗的裝載配體的低溫溶液。
蛋白配體複合物的共晶篩選。
蛋白友好的二甲基亞砜(DMSO/環己烷/乙二醇)混合劑應改善配體溶解。
包含2,3-丁二醇 - 與酶活性兼容。

來自ICCBM 15海報展示的晶體照片。在不同配體存在下生長的野生型人轉甲狀腺素(TTR)晶體的顯微照片。(A) TTR-16α-溴雌醇複合物的晶體。這些晶體是在較低濃度的PEG條件下生長的。PEG可以參與類固醇的溶解,但濃度的微小變化對配體晶體生長幾乎沒有影響。(B) 在pH7.4條件下,存在姜黃素時生長的TTR晶體。
二惡烷和二醇對蛋白質不溶性有相反的影響,可以用來改善晶體。在蒸汽擴散實驗中,二惡烷增加了儲層溶液的沉澱能力。二惡烷-PEG混合物允許單獨PEG不能沉澱的蛋白質結晶。二惡烷也是蛋白質結晶中常見的沉澱劑/添加劑。
多組分低溫保護劑溶液(CM1-CM18)CryoMixes? CM1-CM18 是一套擴展型多組分溶液(除了在CryoProtX?, MD1-61中提供的之外),用于晶體的低溫保護和單步低溫浸泡,並且包括了在CryoProtX?中未發現的附加組分,如二惡烷和丁二醇,使這些條件更適合于通常在標准低溫溶液中不溶的配體的工作。
配方說明:CryoSol?試劑使用超純水(>18.0 MΩ)配制,並通過0.22微米過濾器無菌過濾。沒有添加防腐劑。可從Molecular Dimensions公司獲取用于優化的單獨試劑和儲備溶液。
MiTeGen-CryoSol文獻參考:
Ciccone L, Tepshi L, Nencetti S, Stura EA.N Biotechnol. (2015)“Transthyretin complexes with curcumin and bromoestradiol: Evaluation of solubilizing multicomponentmixtures” 32(1):54-64.
L Vera, EA Stura - Crystal Growth & Design, (2014)“Strategies for Protein Cryocrystallography”,14 (2), 427-435.
Ciccone L., Vera L., Tepshi L., Rosalia L., Rossello A. & SturaE.A. "Multicomponent mixtures for cryoprotection andligand solubilization." Biotechnology Reports 7 (2015): 120-127. Open Access
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